استخراج آران‌ای
استخراج آران‌ای فرآیندی است که طی آن آران‌ای (RNA) کل موجود در یک نمونه هموژنیزه شده سلولی جدا و تصفیه می‌شود. این روش آزمایشگاهی در بیوتکنولوژی، مهندسی ژنتیک و... کاربرد ویژه‌ای دارد و یکی از پیشنیازهای ضروری در فرآیندهایی همچون واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) و RT-PCR ، نورترن بلاتینگ و دیگر روشها می‌باشد.[۱][۲]
مراحل استخراج
[ویرایش]روش‌های مختلفی برای استخراج آران‌ای وجود دارد که از میان آنها به روش زیر که طی هفت مرحله انجام می‌شود اشاره می‌گردد.
۱. برداشت بافت
[ویرایش]نخستین مرحله از استخراج آران‌ای است که طی آن بافت مرود نظر از میان مجموعه بافتی بدن جدا می‌شود که برای این منظور می‌توان از پروتئازها استفاده نمود. گاهی نیز در محیط آزمایشگاه بافت‌های آماده در ته فلاسک وجود دارند که برای جدا کردن آنها از تریپسین و EDTA استفاده می‌شود.
۲. همگن سازی
[ویرایش]در دومین گام باید آران‌ای و دیگر اجزای سلولی را از محاصره غشایی خارج نموده که بدین منظور باید مجموعه سلولی را تخریب کرده و ترکیبی همگن بدست آورد. RNX-Plus یا Trizol در این مرحله مورد استفاده قرار می‌گیرند.
۳. جداسازی فازها
[ویرایش]در این مرحله آران‌ای را از DNA و پروتئین‌های سلولی جدا می‌نمایند. پس از اضافه نمودن کلروفرم به نمونه آنرا تحت شرایط ویژه‌ای سانتریفیوژ کرده که در پایان سه فاز تفکیک شده را حاصل می‌نماید. فاز زیرین مربوط به پروتئین‌ها، فاز میانی مربوط به DNA و فاز رویین مربوط به RNA می‌باشد.
۴. رسوب سازی
[ویرایش]در این مرحله پس از انتقال فاز رویین به لوله‌ای دیگر با استفاده ایزوپروپانول و سپس سانترفیوژ آران‌ای را رسوب می‌دهیم.
۵. شستشو
[ویرایش]ششتشوی رسوب آران‌ای با استفاده از اتانول ۷۵٪ گام پنجم را تشکیل می‌دهد. نکته: در استخراج DNA شستشو با الکل ۷۰٪ انجام می‌شود ولی در استخراج آران‌ای با الکل ۷۵٪
۶. محلول سازی
[ویرایش]انحلال رسوب آران‌ای با استفاده از DEPC treated Water ششمین گام از استخراج آران‌ای می‌باشد
۷. تجزیه و تحلیل
[ویرایش]آخرین گام سنجش صحت استخراج آران‌ای می‌باشد که از دو طریق اسپکتروسکوپی یا الکتروفورز کمیت یا کیفیت کار مورد ارزیابی قرار می‌گیرد.
منبع
[ویرایش]- ↑ Peirson SN, Butler JN (2007). "RNA extraction from mammalian tissues". Methods Mol. Biol.. Methods in Molecular
- ↑ «نسخه آرشیو شده». بایگانی‌شده از اصلی در ۱۶ فوریه ۲۰۱۳. دریافت‌شده در ۲۲ ژانویه ۲۰۱۳.