استخلاص الرنا
استخلاص الرنا (بالإنجليزية: RNA extraction) هو تنقية الرنا من العينات البيولوجية، هذا الإجراء معقد بسبب تواجد إنزيمات الريبونزكلياز الوفير في الخلايا والأنسجة، والتي بإمكانها تفكيك الرنا بسرعة.[1] تُستَخدم العديد من الطرق في علم الأحياء الجزيئي لعزل الرنا من العينات، وأشهر هذه الطرق هي استخلاص حمض ثيوسيانات الغوانيدنيوم-فينول-كلوروفورم (en).[2][3] تتميز طريقة ورقة الترشيح في التحليل والشطف بقدرة إنتاجية عالية.[4]
استخلاص الرنا في سائل الهيدروجين باستخدام هاون ومدقة (أو آلة فولاذية تعرف بساحقة النسيج) مفيد كذلك في منع نشاط الريبونوكليازات.
التلوث بالرناز
[عدل]استخلاص الرنا في تجارب علم الأحياء الخلوي يُعقده بشدة تواجد جزيئات الرناز الوافر والقوي والتي تقوم بتفكيك عينات الرنا. يمكن لبعض جزيئات الرناز أن تكون قوية للغاية وتثبيطها صعب مقارنة بتثبيط الدنازات. فضلا عن الرناز الخلوي المتحرر، توجد العديد من الرنازات في المحيط الجواري. تطورت الرنازات للقيام بالعديد من الوظائف الخلوية في مختلف الكائنات،[5][6][7] على سبيل المثال: يتم فرز الرناز 7 وهو عضو من العائلة الكبيرة رناز A بواسطة الجلد البشري ويعمل كعامل قوي مضاد للمرض.[8][9] بالنسبة لهذه الرنازات المفرَزَة، حتى النشاط الإنزيمي قد لا يكون ضروريا لعملها المتوقع فعل سبيل المثال تعمل الرنازات المناعية عبر إزالة استقرار الغشاء الخلوي للبكتيريا.[10][11]
لمواجهة هذا، يتم غسل المعدات التي تُستخدم لاستخلاص الرنا بعناية وتتُرك مفصولة عن باقي معدات المخبر، كما تعالج بختلف المواد الكيميائية القوية للقضاء على الرنازات. لسبب ما يحرص مؤدوا التجارب على عدم ترك جلدهم العاري يلمس المعدات.
مراجع
[عدل]- ^ Peirson SN, Butler JN (2007). "RNA extraction from mammalian tissues". Methods Mol. Biol. Methods in Molecular Biology. ج. 362: 315–27. DOI:10.1007/978-1-59745-257-1_22. ISBN:978-1-58829-417-3. PMID:17417019. مؤرشف من الأصل في 2020-08-23.
- ^ Chomczynski P, Sacchi N (2006). "The single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction: twenty-something years on". Nat Protoc. ج. 1 ع. 2: 581–5. DOI:10.1038/nprot.2006.83. PMID:17406285.
- ^ Bird IM (2005). "Extraction of RNA from cells and tissue". Methods Mol. Med. ج. 108: 139–48. PMID:16028681.
- ^ FortiusBio High Throughput RNA Extraction Filter Paper Card نسخة محفوظة 6 مايو 2016 على موقع واي باك مشين.
- ^ Rossier، O.؛ Dao، J.؛ Cianciotto، N. P. (2009). "A type II secreted RNase of Legionella pneumophila facilitates optimal intracellular infection of Hartmannella vermiformis". Microbiology. ج. 155 ع. 3: 882–890. DOI:10.1099/mic.0.023218-0. PMC:2662391. PMID:19246759.
- ^ Luhtala، N.؛ Parker، R. (2010). "T2 Family ribonucleases: Ancient enzymes with diverse roles". Trends in Biochemical Sciences. ج. 35 ع. 5: 253–259. DOI:10.1016/j.tibs.2010.02.002. PMC:2888479. PMID:20189811.
- ^ Dyer، K. D.؛ Rosenberg، H. F. (2006). "The RNase a superfamily: Generation of diversity and innate host defense". Molecular Diversity. ج. 10 ع. 4: 585–597. DOI:10.1007/s11030-006-9028-2. مؤرشف من الأصل في 2019-07-31.
- ^ Harder، J. (2002). "RNase 7, a Novel Innate Immune Defense Antimicrobial Protein of Healthy Human Skin". Journal of Biological Chemistry. ج. 277 ع. 48: 46779–46784. DOI:10.1074/jbc.M207587200. PMID:12244054.
{{استشهاد بدورية محكمة}}: صيانة الاستشهاد: دوي مجاني غير معلم (link) - ^ Köten، B.؛ Simanski، M.؛ Gläser، R.؛ Podschun، R.؛ Schröder، J. M.؛ Harder، J. R. (2009). "RNase 7 Contributes to the Cutaneous Defense against Enterococcus faecium". PLoS ONE. ج. 4 ع. 7: e6424. DOI:10.1371/journal.pone.0006424. PMC:2712763. PMID:19641608.
{{استشهاد بدورية محكمة}}: صيانة الاستشهاد: دوي مجاني غير معلم (link) - ^ Huang، Y. -C.؛ Lin، Y. -M.؛ Chang، T. -W.؛ Wu، S. -J.؛ Lee، Y. -S.؛ Chang، M. D. -T.؛ Chen، C.؛ Wu، S. -H.؛ Liao، Y. -D. (2006). "The Flexible and Clustered Lysine Residues of Human Ribonuclease 7 Are Critical for Membrane Permeability and Antimicrobial Activity". Journal of Biological Chemistry. ج. 282 ع. 7: 4626–4633. DOI:10.1074/jbc.M607321200. PMID:17150966.
{{استشهاد بدورية محكمة}}: صيانة الاستشهاد: دوي مجاني غير معلم (link) - ^ Rosenberg، H. F. (2008). "RNase a ribonucleases and host defense: An evolving story". Journal of Leukocyte Biology. ج. 83 ع. 5: 1079–87. DOI:10.1189/jlb.1107725. PMC:2692241. PMID:18211964.
